MALDI分子量分析样品是如何样品制备?

样品若是溶液样品,浓度及盐离子浓度合适,直接进行上机测试,不经处理。若是固体样品,直接溶解在20%ACN,0.1%FA,等易挥发试剂中,进行上机即可。

样品中含糖时能否进行分子量测试?

样品中是多糖位点,多种糖型时, 因为出峰较杂,规律性较差,无法进行去卷积。在MALDI-TOF的分子量测试时 ,因为含糖基之后的蛋白质在飞行管内的飞行路线会发生改变。所以导致检测分子量不准确,一般会偏小1-2万分子量。

HPLC质量肽图,同一肽段出现不同的洗脱时间?

出现不同的洗脱时间,可能由于肽段有异构化现象,分子量一样,但是极性不同,所以会出现洗脱时间有一定的差异。另外有些可能是由于肽段的丰度较高,洗脱时间过长,出现一定的拖尾现象。

全序列检测适用多少氨基酸的小肽?

适用于800-4000Da左右的小肽,太长的序列用MALDI-TOF的方法二级可能碎裂不太完全。

HPLC肽图检查法,胰酶的自切峰会不会出现在肽谱图上?

胰酶的使用量是蛋白质的1/50,在质谱上基本不会对蛋白质的肽段峰产生影响。

HPLC肽图检查法的实验重复性如何?能否做到样品和对照的比较?

重复性较好,能通过和标准对照品一同实验来比较一致性,主要是判断出峰数量和出峰时间的一致性。最好是样品和对照品一同酶解,一同进行液相检测。如果中间隔较长时间,且不是同一批酶解,可能会出现细小的差别。主要是酶解较难控制。

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