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质谱法N糖基化位点分析

作为一种普遍存在的翻译后修饰,N 糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响。糖蛋白包含复杂的糖组成,其存在、缺失、连接位点和相对丰度对蛋白质的效价和稳定有非常重要的影响。ICH Q6B指南要求测定糖基化数量、位点和糖型。

一般发生N-糖基化位点修饰的蛋白质,均有基本的氨基酸结构骨架。首先对蛋白质进行酶解,然后用PNGase F糖苷酶切除链接在ASN上的糖链,通过高精度LC-MS/MS检测脱糖后肽段,确认脱糖后分子量与理论分子量的变化以及糖基化修饰肽段的序列,从而确定蛋白质的糖基化位点。

实验仪器

1) Q-Exactive, ThermoFisher Scientific

2) Easy-nLC 1000, ThermoFisher Scientific

分析内容

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